黄渤、秦昊、贾冰、高圆圆、马东、金靖、宋木子将作为观众代表，除此之外，每期还有一位神秘观众代表，陪伴大家度过一个又一个的喜剧奇妙夜晚！节目秉持“只要大声笑，烦恼都丢掉”的宗旨，喜剧小队们将围绕最具热点和最有共鸣的情绪主题演绎喜剧作品，用喜剧解构一切。
承接上季，《他和她的喵店長2》繼續走訪不同社區，包括有「香港貓島」之稱的「大澳漁村」、被稱為「香港貓王國」的愛民邨、石硤尾邨、牛池灣村……搜羅當中的「人氣」貓店長，探索人貓共處的窩心故事，帶出社區的變遷。愛民邨竟有「神獸」？大澳的貓義工有甚麼難忘經歷？炎明熹不僅獻聲擔任旁白，更親自帶大家尋訪可愛貓店長，本身為攝影師的《聲夢2》學員江廷慧也會用她拍攝的照片、影像製作短片，呈現多位貓店長的生活百態……
